Szybka i prosta analiza struktury drugorzędowej ludzkiej pepsyny za pomocą przenośnego spektrometru Ramana

Ludzka pepsyna jest proteazą trawienną, która odgrywa ważną rolę w ludzkim układzie pokarmowym. Drugorzędowa struktura ludzkiej pepsyny determinuje jej bioaktywność. Dlatego dogłębne zrozumienie zmian struktury drugorzędowej ludzkiej pepsyny jest szczególnie ważne dla dalszej poprawy wydajności funkcji biologicznej ludzkiej pepsyny. Jednak złożoność i różnorodność struktury drugorzędowej ludzkiej pepsyny utrudnia jej analizę. W niniejszym dokumencie opracowano wygodną metodę szybkiego wykrywania drugorzędowej struktury ludzkiej pepsyny za pomocą przenośnego spektrometru Ramana. Zgodnie ze zmianą powierzchni wzmocnionejSpektroskopia Ramana (SERS) intensywność sygnału i aktywność ludzkiej pepsyny przy różnych wartościach pH, ​​analizujemy zmianę struktury drugorzędowej ludzkiej pepsyny. Wyniki wskazują, że zawartość arkusza β stopniowo wzrastała wraz ze wzrostem pH w zakresie aktywnym, co jest zgodne z pomiarami dichroizmu kołowego (CD).
Zmiana struktury drugorzędowej poprawia czułość wykrywania ludzkiej pepsyny SERS. Tymczasem ludzka pepsyna jest powszechnie stosowanym markerem choroby do nieinwazyjnej diagnozy choroby refluksowej przełyku (GERD); granica wykrywalności ludzkiej pepsyny, którą otrzymaliśmy, wynosi 2 μg/ml za pomocą powyższej metody. Prawdziwy scenariusz wykrywania klinicznego jest również symulowany przez dodanie roztworu pepsyny do śliny, a standardowy wskaźnik odzysku wynosi 80,7-92,3%. Wyniki te pokazują wielką perspektywę naszej metody w badaniu struktury drugorzędowej białek, a ponadto promują zastosowanie SERS w diagnostyce klinicznej.

 Ekspozycja na pepsynę w środowisku niekwaśnym zwiększa ekspresję mucyny 5AC (MUC5AC) poprzez metaloproteinazę macierzy 9 (MMP9)/czynnik jądrowy κB (NF-κB) w  ludzkich komórkach  nabłonka dróg oddechowych

Refluks żołądkowy (GR) to cofanie się treści żołądkowej do przewodu pokarmowego. Wcześniej stwierdzono, że GR jest związany z chorobami zapalnymi dróg oddechowych i potencjalną przyczyną przebudowy dróg oddechowych. Przewlekła ekspozycja na treść żołądkową może powodować uszkodzenia od nosa do płuc, ponieważ enzymy trawienne i kwasowość są toksyczne dla komórek nabłonka dróg oddechowych.

Ostatnio stwierdzono, że toksyczność pepsyny w środowisku niekwaśnym zwiększa prozapalne cytokiny i receptory w nabłonku przewodu pokarmowego. Jednak wpływ pepsyny w warunkach bezkwasowych na ekspresję mucyny nie był badany w ludzkich komórkach nabłonka dróg oddechowych. Celem tego badania była ocena wpływu pepsyny na ekspresję mucyny 5AC (MUC5AC) w komórkach nabłonka górnych i dolnych dróg oddechowych jako ważnego potencjalnego czynnika niekwaśnego zapalenia dróg oddechowych związanego z GR.

W komórkach NCI-H292 i ludzkich komórkach nabłonka nosa (HNEpC) wpływ i szlaki sygnałowe pepsyny na ekspresję MUC5AC zbadano za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją ( RT-PCR), PCR w czasie rzeczywistym, immunoenzymatycznego testu, zymografii, Western biot i barwienie immunofluorescencyjne.
Pepsyna zwiększyła ekspresję MUC5AC w warunkach bezkwasowych komórek NCI-H292 i HNEpC. Ponadto aktywowana pepsyną metaloproteinaza macierzy 9 (MMP9) i fosforylowany czynnik jądrowy κB (NF-κB). Co więcej, inhibitory MMP9 i NF-κB znacząco osłabiały indukowaną pepsyną ekspresję MUC5AC, a knockdown NF-κB przez mały interferujący RNA (siRNA) znacząco blokował indukowaną pepsyną ekspresję MUC5AC w ludzkich komórkach nabłonka dróg oddechowych.

Walidacja w Chinach nieinwazyjnego  biomarkera pepsyny  ślinowej zawierającego dwa unikalne  przeciwciała monoklonalne dla ludzkiej  pepsyny  do diagnozowania choroby refluksowej przełyku.

Peptest to nowy nieinwazyjny test do diagnostyki refluksu oparty na technologii przepływu bocznego, który zawiera dwa wysoce specyficzne przeciwciała monoklonalne dla ludzkiej pepsyny do wykrywania pepsyny, biomarkera choroby refluksowej. Głównym celem tego wieloośrodkowego badania klinicznego była walidacja skuteczności preparatu Peptest u pacjentów z rozpoznaniem refluksu żołądkowo-przełykowego i zdrowych osób z grupy kontrolnej w Chinach. Pacjenci z podejrzeniem refluksu żołądkowo-przełykowego zostali poddani endoskopii i zostali zaklasyfikowani do podgrup z nienadżerkową chorobą refluksową i nadżerkowym zapaleniem przełyku. Zrekrutowano również zdrową grupę kontrolną . Wszyscy uczestnicy otrzymali kwestionariusz choroby refluksowej – pacjenci z wynikiem powyżej 12 punktów i kontrolni z wynikiem zero.
Wszyscy uczestnicy dostarczyli próbkę śliny poposiłkowej, a większość pacjentów oddała dodatkową próbkę po objawach do analizy pepsyny. Łącznie zrekrutowano 1032 uczestników w wieku od 19 do 78 lat. Składały się one z 488 pacjentów z nienadżerkową chorobą refluksową, 221 z nadżerkowym zapaleniem przełyku i 323 zdrowych osób z grupy kontrolnej. Liczba przeanalizowanych próbek poposiłkowych i poobjawowych wyniosła odpowiednio 1031 i 692. Wyniki we wszystkich ośrodkach wykazały ogólną wrażliwość na pepsyno dodatnią 85%, swoistość 60%, dodatnią wartość predykcyjną 82%, ujemną wartość predykcyjną 65% i dodatni współczynnik wiarygodności 2,12. wysoka, ale swoistość osiągnięta w niektórych ośrodkach była niska, co skutkowało ogólnie jedynie umiarkowaną swoistością. Uzasadnione są dalsze diagnostyczne badania śledcze.
Human Pepsin Elisa Kit
Human Pepsin Elisa Kit

Białko szoku cieplnego 70 jest indukowane przez  pepsynę  za pośrednictwem sygnalizacji MAPK w  ludzkich  komórkach nabłonka nosa

Ostatnie badania wykazały, że refluks krtaniowo-gardłowy jest związany z przewlekłym zapaleniem zatok przynosowych. Pepsyna może być kluczowym czynnikiem zaangażowanym w uszkodzenie komórek nabłonka błony śluzowej nosa, ale patogeneza pozostaje niejasna. Mamy zbadać, czy szlak kinazy białkowej aktywowanej mitogenami (MAPK) reguluje ekspresję białka szoku cieplnego 70 (HSP70) w pierwotnych hodowlach ludzkich komórek nabłonka nosa (HNEpC) w odpowiedzi na stymulację pepsyną. Poziomy ekspresji białka HSP70 w HNEpC oszacowano za pomocą Analiza Western blot po leczeniu pepsyną. Oceniono również poziomy aktywności szlaku MAPK, aby wyjaśnić mechanizm leżący u podstaw wpływu pepsyny na HSP70 w HNEpC. Inhibitory szlaków sygnałowych wykorzystano do określenia udziału MAPK w odpowiedzi HSP70 po stymulacji pepsyną.
Zmierzono apoptozę komórkową i żywotność komórek w HNEpC po leczeniu pepsyną. Ekspresja HSP70 wzrosła po stymulacji pepsyną i spadła po usunięciu pepsyny. Aktywacja p38 indukowana pepsyną, kinaza regulowana sygnałem zewnątrzkomórkowym 1/2 i kinaza N-końcowa c-Jun (JNK) 1/2. Hamowanie JNK1/2 zmniejszało ekspresję HSP70 w HNEpC. Apoptoza w HNEpC w 12 h po leczeniu pepsyną o pH 7,0 znacząco wzrosła w porównaniu z grupą kontrolną i grupami o pH 7,0. Żywotność komórek zmniejszyła się po ekspozycji na pepsynę o pH 7,0. Pepsyna, nawet przy obojętnym pH 7,0, zwiększa ekspresję HSP70 w HNEpC poprzez aktywację szlaku sygnałowego JNK/MAPK. Podwyższony HSP70 może być mechanizmem ochronnym, gdy pepsyna jest obecna w innych częściach ciała.

Spontaniczna   , katalizowana  pepsyną C aktywacja ludzkiego  pepsynogenu C w hodowli zawiesinowej transgenicznych komórek ryżu: Produkcja i charakterystyka  ludzkiej  pepsyny  C.

Ludzki gen pepsynogenu C (hPGC) zsyntetyzowano z użyciem kodonów zoptymalizowanych pod kątem ryżu i sklonowano do wektora ekspresyjnego ryżu zawierającego promotor, peptyd sygnałowy i terminator pochodzący z genu α-amylazy ryżu 3D (Ramy3D). Ponadto do końca 3′ syntetycznego genu hPGC dodano znacznik 6-His w celu łatwego oczyszczenia. Roślinny wektor ekspresyjny wprowadzono do kalusów ryżowych (Oryza sativa L. cv. Dongjin) za pośrednictwem Agrobacterium tumefaciens. Integrację genu hPGC do chromosomu transgenicznego kalusa ryżowego i ekspresję hPGC w zawiesinach transgenicznych komórek ryżu zweryfikowano za pomocą amplifikacji genomowej reakcji łańcuchowej polimerazy DNA i analizy Northern blot.

Pepsin ELISA Kit| Rat Pepsin ELISA Kit

EF017993 Lifescience Market 96 Tests 689 EUR

Human Pepsin ELISA Kit

20-abx152697 Abbexa
  • 7112.00 EUR
  • 3792.00 EUR
  • 879.00 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Human Pepsin ELISA Kit

abx253017-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Human Pepsin ELISA Kit

20-abx258448 Abbexa
  • 7378.00 EUR
  • 3933.00 EUR
  • 911.00 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Human Pepsin ELISA Kit

CN-03533H1 ChemNorm 96T 468 EUR

Human Pepsin ELISA Kit

CN-03533H2 ChemNorm 48T 322 EUR

Human Pepsin ELISA kit

E01P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Human Pepsin ELISA kit

E01P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Human Pepsin ELISA kit

E01P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

SEA632Hu-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 4731.5 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

SEA632Hu-1x48wellstestplate Cloud-Clone 1x48-wells test plate 477.3 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

SEA632Hu-1x96wellstestplate Cloud-Clone 1x96-wells test plate 639 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

SEA632Hu-5x96wellstestplate Cloud-Clone 5x96-wells test plate 2575.5 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

4-SEA632Hu Cloud-Clone
  • 4782.00 EUR
  • 2526.00 EUR
  • 640.00 EUR
  • 10 plates of 96 wells
  • 5 plates of 96 wells
  • 1 plate of 96 wells

Human Pepsin, PG ELISA Kit

CSB-E08919h-24T Cusabio 1 plate of 24 wells 165 EUR

Human Pepsin, PG ELISA Kit

1-CSB-E08919h Cusabio
  • 900.00 EUR
  • 5476.00 EUR
  • 2900.00 EUR
  • 1 plate of 96 wells
  • 10 plates of 96 wells each
  • 5 plates of 96 wells each

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Hu-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 4502.43 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Hu-1x48wellstestplate Cloud-Clone 1x48-wells test plate 458.44 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Hu-1x96wellstestplate Cloud-Clone 1x96-wells test plate 612.05 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Hu-5x96wellstestplate Cloud-Clone 5x96-wells test plate 2454.23 EUR

Human Pepsin (PP) ELISA Kit

4-CEA632Hu Cloud-Clone
  • 4553.00 EUR
  • 2405.00 EUR
  • 613.00 EUR
  • 10 plates of 96 wells
  • 5 plates of 96 wells
  • 1 plate of 96 wells

Human Pepsin ELISA Kit (PP)

RK02117 Abclonal 96 Tests 521 EUR

Human Pepsin(PP)ELISA Kit

GA-E0939HM-48T GenAsia Biotech 48T 289 EUR

Human Pepsin(PP)ELISA Kit

GA-E0939HM-96T GenAsia Biotech 96T 466 EUR

Human Pepsin,PP ELISA Kit

201-12-0923 SunredBio 96 tests 440 EUR

Human Pepsin A ELISA Kit

abx253940-96tests Abbexa 96 tests 637 EUR

Human Pepsin(PP)ELISA Kit

QY-E01049 Qayee Biotechnology 96T 361 EUR

Human PP(Pepsin) ELISA Kit

EH3629 FN Test 96T 524.1 EUR

Chicken Pepsin ELISA Kit

abx354711-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Monkey Pepsin ELISA Kit

abx354985-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Rabbit Pepsin ELISA Kit

abx355279-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Mouse Pepsin ELISA Kit

abx254361-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Pig Pepsin ELISA Kit

abx255552-96tests Abbexa 96 tests 786 EUR

Rat Pepsin ELISA Kit

abx255946-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Mouse Pepsin ELISA Kit

20-abx258284 Abbexa
  • 7237.00 EUR
  • 3855.00 EUR
  • 895.00 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Rat Pepsin ELISA Kit

20-abx258285 Abbexa
  • 7237.00 EUR
  • 3855.00 EUR
  • 895.00 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Mouse Pepsin ELISA Kit

CN-02572M1 ChemNorm 96T 447 EUR

Mouse Pepsin ELISA Kit

CN-02572M2 ChemNorm 48T 296 EUR

Rat Pepsin ELISA Kit

CN-01695R1 ChemNorm 96T 457 EUR

Rat Pepsin ELISA Kit

CN-01695R2 ChemNorm 48T 306 EUR

Rat Pepsin ELISA kit

E02P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rat Pepsin ELISA kit

E02P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Rat Pepsin ELISA kit

E02P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Monkey Pepsin ELISA kit

E09P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Monkey Pepsin ELISA kit

E09P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Monkey Pepsin ELISA kit

E09P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Dog Pepsin ELISA kit

E08P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Dog Pepsin ELISA kit

E08P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Dog Pepsin ELISA kit

E08P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Mouse Pepsin ELISA kit

E03P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Mouse Pepsin ELISA kit

E03P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Mouse Pepsin ELISA kit

E03P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Pig Pepsin ELISA kit

E07P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Pig Pepsin ELISA kit

E07P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Pig Pepsin ELISA kit

E07P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Rabbit Pepsin ELISA kit

E04P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rabbit Pepsin ELISA kit

E04P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Rabbit Pepsin ELISA kit

E04P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Goat Pepsin ELISA kit

E06P0699-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Goat Pepsin ELISA kit

E06P0699-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Goat Pepsin ELISA kit

E06P0699-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

ELISA kit for Human PP (Pepsin)

E-EL-H2050 Elabscience Biotech 1 plate of 96 wells 534 EUR

ELISA kit for Human Pepsin (PG)

KTE61240-48T Abbkine 48T 354 EUR

ELISA kit for Human Pepsin (PG)

KTE61240-5platesof96wells Abbkine 5 plates of 96 wells 2252 EUR

ELISA kit for Human Pepsin (PG)

KTE61240-96T Abbkine 96T 572 EUR

Human PGA/ Pepsin A ELISA Kit

E1914Hu Sunlong 1 Kit 571 EUR

Human Pepsin A-3 ELISA Kit

abx513566-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

ELISA kit for Human Pepsin A

EK2057 SAB 96 tests 553 EUR

Human PGA3(Pepsin A) ELISA Kit

EH0985 FN Test 96T 524.1 EUR

Human Pepsin A, PGA3 ELISA Kit

ELI-02244h Lifescience Market 96 Tests 824 EUR

Pepsin

GE5559-100G Glentham Life Sciences 100 g 158 EUR

Pepsin

GE5559-25G Glentham Life Sciences 25 g 78 EUR

Pepsin

GE5559-5G Glentham Life Sciences 5 g 54 EUR

Pepsin

abx082440-25g Abbexa 25 g 189 EUR

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed

ELISA-1 Alpha Diagnostics 1 202 EUR

Pepsin Assay Kit

abx298847-100Assays Abbexa 100 Assays 425 EUR

Rat Pepsin, PG ELISA Kit

CSB-E08920r-24T Cusabio 1 plate of 24 wells 165 EUR

Rat Pepsin, PG ELISA Kit

1-CSB-E08920r Cusabio
  • 967.00 EUR
  • 5925.00 EUR
  • 3134.00 EUR
  • 1 plate of 96 wells
  • 10 plates of 96 wells each
  • 5 plates of 96 wells each

Mouse Pepsin, PG ELISA Kit

CSB-E08921m-24T Cusabio 1 plate of 24 wells 165 EUR

Mouse Pepsin, PG ELISA Kit

1-CSB-E08921m Cusabio
  • 946.00 EUR
  • 5782.00 EUR
  • 3060.00 EUR
  • 1 plate of 96 wells
  • 10 plates of 96 wells each
  • 5 plates of 96 wells each

Mouse Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Mu-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 4626.78 EUR

Mouse Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Mu-1x48wellstestplate Cloud-Clone 1x48-wells test plate 468.68 EUR

Mouse Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Mu-1x96wellstestplate Cloud-Clone 1x96-wells test plate 626.68 EUR

Mouse Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Mu-5x96wellstestplate Cloud-Clone 5x96-wells test plate 2520.06 EUR

Mouse Pepsin (PP) ELISA Kit

4-CEA632Mu Cloud-Clone
  • 4677.00 EUR
  • 2471.00 EUR
  • 627.00 EUR
  • 10 plates of 96 wells
  • 5 plates of 96 wells
  • 1 plate of 96 wells

Rat Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Ra-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 4626.78 EUR

Rat Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Ra-1x48wellstestplate Cloud-Clone 1x48-wells test plate 468.68 EUR

Rat Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Ra-1x96wellstestplate Cloud-Clone 1x96-wells test plate 626.68 EUR

Rat Pepsin (PP) ELISA Kit

CEA632Ra-5x96wellstestplate Cloud-Clone 5x96-wells test plate 2520.06 EUR

Rat Pepsin (PP) ELISA Kit

4-CEA632Ra Cloud-Clone
  • 4677.00 EUR
  • 2471.00 EUR
  • 627.00 EUR
  • 10 plates of 96 wells
  • 5 plates of 96 wells
  • 1 plate of 96 wells

Rat Pepsin(PP)ELISA Kit

GA-E0628RT-48T GenAsia Biotech 48T 317 EUR

Rat Pepsin(PP)ELISA Kit

GA-E0628RT-96T GenAsia Biotech 96T 496 EUR

Mouse Pepsin(PP)ELISA Kit        

GA-E0648MS-48T GenAsia Biotech 48T 336 EUR

Mouse Pepsin(PP)ELISA Kit        

GA-E0648MS-96T GenAsia Biotech 96T 534 EUR

Chicken Pepsin A ELISA Kit

abx513564-96tests Abbexa 96 tests 911 EUR

Dog Pepsin A ELISA Kit

abx513565-96tests Abbexa 96 tests 911 EUR

Pig Pepsin A ELISA Kit

abx513568-96tests Abbexa 96 tests 911 EUR

Rat Pepsin(PP)ELISA Kit

QY-E11024 Qayee Biotechnology 96T 361 EUR

Mouse Pepsin(PP)ELISA Kit

QY-E21144 Qayee Biotechnology 96T 361 EUR

Mouse PP(Pepsin) ELISA Kit

EM1304 FN Test 96T 524.1 EUR
Analiza Western blot wykazała zarówno hPGC, jak i jego dojrzałą formę, ludzką pepsynę C, z masami 42- i 36-kDa w pożywce hodowlanej w warunkach głodu cukru. Ludzką pepsynę C oczyszczono z pożywki hodowlanej przy użyciu kolumny agarozowej Ni-NTA, a sekwencje NH2-końcowych 5-reszt zostały zweryfikowane przez sekwencjonowanie aminokwasów. Aktywność hydrolizującą ludzkiej pepsyny C potwierdzono stosując jako substrat hemoglobinę wołową. Optymalne pH i temperatura dla aktywności pepsyny wynosiły odpowiednio 2,0 i 40°C.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.